噬菌體展示技術(shù)抗體發(fā)現(xiàn)平臺(tái)

噬菌體展示抗體技術(shù)將基因型和表型統(tǒng)一于一體，將選擇能力與擴(kuò)增能力結(jié)合起來(lái)，具有強(qiáng)大的篩選能力，能夠在體外模擬體內(nèi)的抗體生成過(guò)程，可以不經(jīng)雜交瘤途徑，甚至不經(jīng)過(guò)免疫就可以制備和生產(chǎn)單克隆抗體。

噬菌體展示技術(shù)的出現(xiàn)為全人重組抗體提供了一條簡(jiǎn)便、快捷的基因工程抗體制備路線，是全人重組抗體制備發(fā)展史上重要的轉(zhuǎn)折點(diǎn)。

近年來(lái)，單域抗體(SdAb)的關(guān)注度也非常高，單域抗體為駝?lì)惡蛙浌囚~(yú)類(lèi)中天然存在的僅由兩條重鏈組成的特殊抗體，只包含一個(gè)重鏈可變區(qū)(VHH, Variable Domain of Heavy Chain Antibody)和兩個(gè)常規(guī)的CH2與CH3區(qū)。單域抗體通過(guò)重鏈上的一個(gè)可變區(qū)(VHH)結(jié)合抗原，該可變區(qū)可以單獨(dú)穩(wěn)定地在體外存在，被稱(chēng)為駝?lì)悊斡蚩贵w(SdAb)或者納米抗體(nanobody)。納米抗體晶體寬為2.5nm，長(zhǎng)4nm，分子量?jī)H為傳統(tǒng)完整抗體的1/10(約15kD)但依然具有完整的抗原識(shí)別能力，得益于納米抗體微小的結(jié)構(gòu)、完整的抗原識(shí)別能力以及噬菌體篩選技術(shù)，納米抗體表現(xiàn)出高親和力、高特異性、強(qiáng)穿透性和易于改造和表達(dá)等特點(diǎn)，并且由于可以獲得抗體完整序列，納米抗體可以通過(guò)體外重組表達(dá)高質(zhì)量穩(wěn)定生產(chǎn)，有效避免傳統(tǒng)抗體的批次間差異問(wèn)題。

納米抗體特點(diǎn)

1.有更長(zhǎng)的CDR3區(qū)(納米抗體CDR3通常由16~24個(gè)氨基酸組成，傳統(tǒng)單抗CDR3僅有7~12個(gè)氨基酸 )，與抗原特異性結(jié)合能力更強(qiáng)

2.結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易于基因工程改造

3.制備簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化放大生產(chǎn)

4.易于人源化

噬菌體抗體庫(kù)的分類(lèi)

抗體庫(kù)是編碼特性未知抗體的抗體基因的巨大集合(通常大于10¹⁰)?？贵w庫(kù)是通過(guò)噬菌體展示和其他體外選擇技術(shù)來(lái)發(fā)現(xiàn)抗體的重要來(lái)源，其設(shè)計(jì)是成功發(fā)現(xiàn)抗體的關(guān)鍵。

隨機(jī)肽庫(kù)：將化學(xué)合成的隨機(jī)寡核苷酸序列與噬菌體的表面蛋白基因融合，在噬菌體表面表達(dá)出各種氨基酸組合的隨機(jī)序列短肽。利用噬菌體展示隨機(jī)肽庫(kù)可以高通量篩選各種抗原的抗原表位

免疫庫(kù)：免疫庫(kù)由經(jīng)過(guò)免疫 ( 包括疫苗注射、微生物感染、自身免疫疾病、腫瘤等 ) 后的供體B淋巴細(xì)胞的抗體基因構(gòu)建。對(duì)于特定免疫抗原的抗體淘選的效率較高，但一般僅適用于一種特異性抗體的選擇，庫(kù)容量要求不高，一般10⁶-10⁸的庫(kù)容量就可滿(mǎn)足需要

天然庫(kù)：采用不經(jīng)免疫的人或動(dòng)物來(lái)源的外周血淋巴細(xì)胞、骨髓、脾細(xì)胞的B細(xì)胞作為材料，進(jìn)行基因擴(kuò)增，但親和力通常較低。骨髓內(nèi)和骨髓外所有抗體基因都包含在內(nèi)，所構(gòu)建的抗體庫(kù)適用于所有抗原所對(duì)應(yīng)的抗體的選擇，庫(kù)容量要求較高，最小需要達(dá)到10⁹，因?yàn)槟壳肮浪愕淖匀唤绲目乖N類(lèi)在這個(gè)數(shù)量級(jí)上

1.豐富的噬菌體抗體技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，5年以上噬菌體抗體開(kāi)發(fā)，交付上百個(gè)噬菌體展示抗體開(kāi)發(fā)項(xiàng)目

2.具有全人源重組抗體庫(kù)，庫(kù)容高達(dá)千億級(jí)別(10¹¹ pfu)，兩步建庫(kù)法，保證了文庫(kù)的多樣性，抗體庫(kù)片段插入正確率高;可以?xún)芍苣玫饺嗽粗亟M抗體

3.可以構(gòu)建多物種(人源、小鼠、兔子、羊駝等)抗體文庫(kù)

4.可以構(gòu)建多種類(lèi)型(scfv、Fab、VHH 等)的抗體文庫(kù)

服務(wù)流程

根據(jù)文庫(kù)中數(shù)百個(gè)隨機(jī)抗體序列分析，其CDR3長(zhǎng)度基本符合正態(tài)分布，跟文獻(xiàn)中報(bào)道的自然VHH抗體CDR3長(zhǎng)度分布相符。

挑選背景值較低的抗體蛋白進(jìn)行親和力測(cè)定，結(jié)果如下：